免疫組化檢查

免疫組化檢查概述

免疫組化檢查(immunohistochemistry examination)指應用免疫抗原抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,確定組織或細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及相對的定量檢查。

免疫組化檢查原理

免疫組織化學利用抗體和抗原具有高度特異性結合的原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物後獲得特異性抗體,再以此抗體探測組織或細胞中的同類抗原。由於抗原與抗體的複合物是無色的,因此必須借助組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯現,以達到對未知抗原進行定性、定位或定量。

免疫組化檢查分類

1. 按標記物質的種類分類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和鹼性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標法和免疫金銀法等。
2. 按染色步驟分類,可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
3. 按結合方式分類,可分為:①抗原-抗體結合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法;②親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶複合物(ABC)法、鏈黴菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(SP)法等。其中SP法是比較常用的方法;③聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合於內源性生物素含量高的組織抗原檢測。

免疫組化檢查常用方法

1. 免疫熒光法
是最早建立的免疫組織化學技術。先將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體複合物中的熒光素受激發光的照射後即會發出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進而還可進行定量分析。
2. 免疫酶標法
免疫酶標方法是繼免疫熒光後,於60年代發展起來的技術。先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然後加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞錶面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前最常用的技術。主要優點是定位準確,對比度好,染色標本可長期保存,適用於光鏡、電鏡研究等。目前免疫酶標法在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統等。
3. 免疫膠體金技術
是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性沒有明顯影響。用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,可對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量。特別適合於免疫電鏡的單標記或多標記定位。也適合進行光鏡觀察。

免疫組化檢查適應證

組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用免疫組化法對相應的特異性抗體進行檢測。