免疫電鏡檢查

免疫電鏡檢查概述

免疫電鏡檢查(immunoeletron microscopy)是免疫組織化學技術與透射電鏡技術相結合,在超微結構水平研究和觀察抗原抗體結合定位的一種方法。主要分為兩大類:一類是免疫凝集電鏡檢查,即抗原抗體凝集反應後,經負染色直接在電鏡下觀察;另一類是免疫電鏡定位檢查。

免疫電鏡檢查原理

利用帶有特殊標記的抗體與相應抗原相結合,在電子顯微鏡下觀察,由於標準物形成一定的電子密度而指示出相應抗原所在的部位。

免疫電鏡檢查分類

根據標記方法的不同,可分為免疫鐵蛋白技術、免疫酶標記技術和免疫膠體金技術。如免疫鐵蛋白技術是將含鐵蛋白通過一種低分子量的雙功能試劑與抗體結合,成為一種雙分子複合物,既可保留抗體的免疫活性,又具有電鏡下可見的高電子密度鐵離子核心,因此用鐵蛋白標記的抗體可通過電鏡免疫化學的方法在電鏡下定位細胞中的抗原。

免疫電鏡檢查檢查步驟

免疫電鏡檢查的操作包括抗體的製備、標本的處理、免疫標記、對照實驗、結果的觀察和解析。
大體檢查步驟以下。
1.免疫複合物的製備:取標本0.9mL,與0.1mL適當稀釋的抗血清混合,在37℃水浴上反應30分鐘,在室溫下反應1小時或在4℃下過夜。
2.濃縮:在17000~23000轉/分下離心1.5小時,將沉澱用少許蒸餾水懸浮,用磷鎢酸負染,滴入400目銅網的Formvar膜上,用濾紙吸去過量的染液。
3.電鏡觀察:在透射電鏡下,放大40000倍觀察。

免疫電鏡檢查註意事項

1. 為證實免疫標記結果的特異性,必須同時進行對照實驗。在保證抗體的特異性的前提下,對照實驗有:①用未經免疫的同種動物正常血清代替第一抗體,結果應為陰性。②不加一抗,結果應為陰性。③用不含有靶抗原的標本進行免疫標記,結果應為陰性。④對肯定含有靶抗原的標本進行免疫標記,結果應為陽性。
2. 在電鏡下觀察免疫標記的結果,通過標記物(膠體金、鐵蛋白或酶底物)顯示免疫反應部位以定位抗原的存在位置,註意區分特異性標記和背景的非特異性標記,進行正確的結果分析。

免疫電鏡檢查臨床意義

免疫電鏡檢查在檢測抗原物質在顯微結構中的定位、檢查未知抗原進行早期診斷方面,具有重要作用。該種技術亦可用檢測急性期和恢復期患者血清抗體效價變化,進行血清學診斷和流行病學調查。