熒光原位雜交

熒光原位雜交概述

熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是一種應用非放射性熒光物質依靠核酸探針雜交原理在細胞核中或染色體上顯示DNA存在與含量的方法。該技術具有快速、安全、靈敏度高以及探針可長期保存等特點,目前已廣泛應用於細胞遺傳學、腫瘤生物學、基因定位、基因作圖、產前診斷及哺乳動物染色體進化研究等領域。

熒光原位雜交檢查前準備

1.向被檢測者解釋本操作的目的、方法等,消除顧慮。
2.選取血液、其他體液或細胞進行檢測,如需要進行有創傷的操作則需要提前完善凝血功能測定等相關檢查。

熒光原位雜交操作方法

1.實驗前細胞處理
包括收集細胞、固定、細胞懸液的製備和保存。
2.玻片準備
滴製備好的細胞樣本到載玻片上,並用乙醇等溶劑處理玻片。
3.預變性和變性
將探針液滴到標本玻片上,小心蓋上蓋玻片並密封,將封好的玻片放在約75℃的熱臺上變性5分鐘。
4.雜交
將玻片置於避光潮濕的盒子中,放入約37℃恆溫環境中約12小時。
5.洗片
小心去掉蓋玻片和封片膠,在約75℃的水浴箱中浸泡並晾乾,加入4,6-脒基-2-苯基吲哚(DAPI),蓋上蓋玻片,避光放置約10分鐘,用熒光顯微鏡觀察。

熒光原位雜交臨床意義

1.基因染色體定位和基因圖譜繪製
可快速確定一系列DNA序列之間的相互次序和距離,完成基因製圖。標記同一DNA鏈與不同種屬細胞的染色體雜交,可以找出不同種屬之間的同源基因以及基因在染色體上的位置,從而瞭解種屬之間的進化關係。
2.檢測染色體數目與結構異常
羊水染色體異常熒光原位雜交技術能夠快速、有效地檢測染色體疾病以便早期確診,結合羊水染色體核型分析是一種有效的染色體疾病的產前診斷辦法。
3.血液腫瘤學應用
基因缺失檢測可以發現一些關鍵基因的缺失,有助於疾病的診斷及預後判斷;使用熒光原位雜交技術可對微小殘留病竈進行檢測,以及進行造血乾細胞移植狀態的監測。
4.實體腫瘤學應用
採用多種染色體探針,以不同的顏色標記,可用於腫瘤染色體數目改變的異質性研究,主要用於對腫瘤的早期診斷、療效檢測、個體化治療和預後判斷等方面。

熒光原位雜交註意事項

1.檢測的過程中,必須保持載玻片的濕潤,以免由於檢測試劑的非特異性結合導致高背景熒光。
2.從熒光素標記到製片結束,整個過程須避光完成,光照會對結果造成影響。
3.必須嚴格按照程序操作,如果在玻片的變性、雜交和信號點計數過程不遵守程序,可能出現錯誤的結果。